Vérification de l'efficacité de la stérilisation des autoclaves

L'un des instruments les plus essentiels d'un laboratoire de microbiologie est le stérilisateur, l'autoclave (stérilisateur à vapeur à haute pression) étant le plus couramment utilisé. Selon le GB 4789.1-2016, les équipements de laboratoire doivent être régulièrement inspectés et / ou calibrés (avec étiquettes d'inspection), entretenus et entretenus pour assurer des performances appropriées et une sécurité opérationnelle. Mais votre autoclave a-t-elle subi de telles inspections? Et si vous souhaitez effectuer une vérification, comment devriez-vous le faire? Aujourd'hui, nous allons résumer les méthodes clés pour vérifier l'efficacité de stérilisation des autoclaves.

La vérification de l'efficacité de stérilisation des autoclave comprend généralement des méthodes telles que l'indicateur chimique, le thermomètre maximal, le tube de température autodidacte et l'indicateur biologique. Bien que ces méthodes partagent des principes similaires - confirmant principalement si le stérilisateur atteint la température requise pendant la stérilisation - vous pouvez choisir un ou plusieurs en fonction des conditions spécifiques de votre laboratoire.

1. Méthode des indicateurs chimiques

Principe: Les indicateurs chimiques subissent un changement de couleur ou de forme dans des conditions de température et de temps spécifiques. Ce changement est utilisé pour déterminer si les paramètres de stérilisation ont été respectés.

Un élément couramment utilisé dans les laboratoires est le ruban indicateur d'autoclave 3M, qui change de couleur après stérilisation. Le ruban est fabriqué à partir de produits chimiques thermosensibles, de développeurs de couleurs et de matériaux de peinture, imprimés en un motif à rayures sur du ruban adhésif. Il est appliqué directement à l'extérieur de l'emballage de stérilisation, avec une longueur minimale de 5 cm. Appuyez légèrement sur le ruban pour assurer une bonne adhérence et sceller. Après avoir été exposé à 121 ° C pendant 20 minutes ou 130 ° C pendant 4 minutes, les rayures blanches diagonales sur le ruban devraient devenir complètement noires. Si le changement de couleur est inégal ou incomplet, l'emballage n'est pas considéré comme correctement stérilisé.

2. Méthode du thermomètre maximum

Principe: Cette méthode utilise un thermomètre Mercury qui ne revient pas à une température plus basse une fois chauffée, similaire à un thermomètre médical traditionnel. Il indique la température maximale atteinte pendant la stérilisation.

Pour la vérification, placez le thermomètre Mercury à l'intérieur d'un ballon Erlenmeyer rempli d'eau. Pendant la stérilisation, positionnez le ballon aux sections supérieures et inférieures de l'autoclave. Après le processus, vérifiez si la lecture du thermomètre correspond à la température requise. Cette méthode ne peut que vérifier la température et ne peut pas confirmer si le temps de stérilisation a été satisfait, il représente donc la norme minimale pour la vérification de l'autoclave.

3. Méthode de la température auto-fabriquée

Principe: Cette méthode utilise certains produits chimiques qui fondent et recristallisent à des températures spécifiques, avec des formes cristallines distinctes après la refroidissement. Ces produits chimiques sont scellés dans de petits tubes en verre et placés à l'intérieur de l'autoclave. Après stérilisation, la forme de cristal est examinée pour déterminer si la température correcte a été atteinte.

L'acide benzoïque est couramment utilisé, avec un point de fusion de 121–123 ° C, qui s'aligne sur la température de stérilisation standard de l'autoclave. L'acide benzoïque massif est scellé dans de petits tubes en verre et placé dans l'autoclave. Après stérilisation, l'état de l'acide benzoïque est observé pour confirmer si la température cible a été atteinte. Comme la méthode du thermomètre maximum, cette approche ne vérifie que la température, et non la durée de la stérilisation.

4. Méthode des indicateurs biologiques

Principe: Cette méthode utilise des spores non pathogènes de Geobacillus stearothermophilus comme organismes indicateurs pour évaluer l'efficacité de la stérilisation thermique. Ces spores sont très résistantes à la chaleur, avec une résistance similaire à celle des spores pathogènes de Clostridium botulinum, ce qui en fait des indicateurs appropriés pour vérifier l'efficacité de la stérilisation.

Des indicateurs biologiques sont disponibles sous trois formes: suspensions de spores, bandes de spores et tubes de spores et de médium intégrés. Ceux-ci sont généralement placés à cinq endroits dans le conteneur de stérilisation: l'avant, le milieu et l'arrière de la couche inférieure, ainsi que les points centraux des couches supérieure et intermédiaire. Après stérilisation, les indicateurs sont inoculés dans de l'eau à bromocresol violet-glucose-peptone et incubés à 55–60 ° C pendant 2 à 7 jours. Si le milieu reste clair et inchangé de couleur, les spores ont été tuées, indiquant une bonne stérilisation. Si le milieu devient jaune et trouble, les spores ont survécu, suggérant une mauvaise performance de stérilisation. Les suspensions de spores et les bandes de spores suivent le même processus de validation.

Les tubes d'indicateurs biologiques commerciaux sont également couramment utilisés dans les laboratoires. Ils contiennent des spores de Geobacillus stearothermophilus et un ampoule en verre scellé avec un milieu de croissance. Les tubes sont placés dans tout le récipient de stérilisation. Après l'autoclavage, l'ampoule de verre est écrasé pour libérer le milieu et le tube est incubé à 56 ° C, le long d'un contrôle positif. Si la stérilisation est inadéquate, les spores survivantes se développent et tournent le bouillon jaune. Si la stérilisation est efficace, les spores sont inactivées et le bouillon reste violet.

Fréquence de vérification

Actuellement, il n'y a pas de norme nationale stricte concernant la fréquence de la vérification de l'efficacité des autoclave. Les laboratoires devraient établir leurs propres calendriers de vérification et y respecter strictement. Compte tenu de la facilité d'utilisation et de la fiabilité des résultats, nous vous recommandons d'utiliser du ruban indicateur en combinaison avec des tubes d'indicateur biologique, car ils offrent un fonctionnement simple et une vérification complète de l'efficacité de stérilisation.

Notes sur la stérilisation (non requise pour certains autoclaves entièrement automatiques importés)
Lorsque vous utilisez un stérilisateur à vapeur à haute pression, il est crucial d'expulser tout l'air froid à l'intérieur de la chambre lorsque la vapeur est libérée. Ce n'est qu'après que tout l'air froid est retiré si la soupape d'échappement est fermée. Si de l'air demeure, le manomètre peut indiquer la pression correcte, mais la température réelle à l'intérieur de la chambre échouera. Plus il y a conservé d'air, plus l'écart entre pression et température est élevé, ce qui entraîne une stérilisation incomplète. (Ceci est souvent observé lors de la stérilisation des milieux de fermentation, où les bulles d'air restent dans de petits tubes de guidage - Entrez plus en profondeur l'air froid.)